大豆胚尖遗传转化体系的优化及CHS8，MYB12b2基因的遗传转化

【摘要】大豆（Glycinemax(L.)Merr）是我国重要的油料作物和蛋白来源，大豆异黄酮（Isoflavone）是一种属于类黄酮（Flavonoid）化合物的次生代谢物，在人类的健康中发挥着极其重要的作用，因此建立一个高效的大豆遗传转化体系并利用转基因技术提高大豆异黄酮非常重要。查尔酮合成酶CHS是控制类黄酮物质合成关键酶之一，它对大豆异黄酮的合成起着非常重要的调节作用。MYB类转录因子是功能最多的一类转录因子，参与植物苯丙烷类次生代谢途径的调节，其中一条分支即为黄酮类代谢途径。分别将CHS8基因和MYB12b2基因构建到了植物表达载体中，得到pCB35SR1R2-GFP-CHS8和pCB35SR1R2-GFP-MYB12b2质粒，并转入根癌农杆菌EHA105，作为转基因工程菌株。因为大豆再生体系的再生频率较低、基因型依赖强、重复性差，因此，大豆遗传转化一直都是植物基因工程领域难点之一。为了建立高效的大豆遗传转化体系体系，论文以大豆吉林35的胚尖再生体系为基础，研究可能影响转化率的关键因素，从预培养培养基的选择、预培养时间、预培养时所加激素浓度、侵染时的超声波时间、筛选剂浓度这几个方面研究其对转化情况的影响，通过对这一系列关键因素的优化，期望得到高效的大豆吉林35胚尖遗传转化体系。结果表明，大豆吉林35的萌发选择液体培养基，并在其中添加2mg/L的激素2,4-D，萌发16～20h。侵染时选用经超声波处理6s后，真空侵染15min，诱芽时期添加的Basta浓度为0.6mg/L，采用本论文中优化后的胚尖遗传转化体系，平均转化率达到31.3%，较优化前有明显提高，证明本论文中对吉林35胚尖遗传转化体系的优化措施是切实有效的。为了验证抗性植株的转化，以PCR检测目的基因和bar基因试纸条检测bar蛋白两种手段进行抗性植株的验证，得到T0代阳性植株76株，T1代阳性植株37个株系，T2代阳性植株14个株系，T3代阳性植株2个株系；通过Glufosinate涂抹实验证明阳性植株对除草剂有明显抗性；T2代植株的异黄酮测定结果说明转基因阳性植株较野生型及转基因阴性植株的异黄酮量都有升高，最高为1.16。
【作者】陈虹地；
【导师】王庆钰；
【作者基本信息】吉林大学，作物遗传育种，2014，硕士
【关键词】大豆；胚尖；遗传转化；CHS8；MYB12b2；

【参考文献】
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